Thèse soutenue le 23 août 2002 pour obtenir le grade de Docteur en Sciences de l'Université Fédérale de Rio de Janeiro
Résumé :
Les Cu+-ATPases, ainsi que toutes les ATPases transportateurs, possèdent des sites de transport membranaires qui forment la voie de passage pour l'ion Cu+. La mutation de certains acides aminés qui sont importants pour le transport du Cu+ peut être responsable pour deux maladies dans l'homéostasie du cuivre : Menkes et Wilson.
Dans cette thèse, nous avons décidé d'étudier le rôle des acides aminés dans les segments transmembranaires qui sont très conservés pour le transport du cuivre. En utilisant Ccc2, la Cu+-ATPase chez la levure
Saccharomyces cerevisiae, 9 mutants ont été obtenus pour réaliser des tests
in vivo (tests en gouttes et courbe de croissance) et
in vitro (phosphorylation et déphosphorylation).
Tous les mutants ont été phosphorylés par l'ATP avec une vitesse comparable, à l'exception du mutant C583S, qui présenta une forte diminution de la vitesse de phosphorylation. Les passes suivantes de déphosphorylation (couplées au transport du Cu+) ont été touchées d'une façon diverse. Les mutations des cystéines 583 et 585 résultent l'expression d'une Cu+-ATPase qui n'est pas capable d'accomplir le cycle catalytique et ont empêché la croissance de levures qui expriment ces protéines mutées. Les mutations de thréonine 37, 541, 591 et 593 ont amené l'expression de Cu+-ATPases avec la capacité d'accomplir le cycle de transfert de Cu+ réduit à travers de la membrane.
Les différents acides aminés mutés sont importants pour former une voie de passage pour le cation ainsi comme pour les différences qui existent dans les maladis citées. Celles-ci pendant leur évolution, peuvent être mis en relation avec le rôle de chaque acide aminé, donc on peut comprendre les mécanismes moléculaires que ce mutations peuvent faire pour accomplir les maladies de l'homéostasie du cuivre.
Jury :
Président : Dr Lucio Mendonça Previato
Dr Celso Caruso Neves
Dr Maria da Gloria da Costa Carvalho
Dr Mauro Solla Penna
Dr Aida Hasson-Voloch
Dr Doris Rosenthal
Mots-clés :
Homéostasie du cuivre, Cu+-ATPase, phosphorylation, maladie de Menkes et Wilson