Thèse soutenue le 30 mars 2005 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Biologie
Résumé :
Avec l’apparition de souches multirésistantes il apparaît indispensable d’identifier de nouvelles cibles pour l’antibiothérapie. Le lien existant entre la biodisponibilité du fer et la virulence est à présent clairement établie. Ainsi l’inactivation de Fur (Ferric uptake regulation), un régulateur global qui n'existe pas chez les organismes supérieurs, pourrait être une cible intéressante. Fur est principalement connu pour son rôle en tant que régulateur de la transcription de nombreux gènes impliqués entre autres dans le métabolisme du fer et la réponse au stress oxydant. Afin de vérifier cette hypothèse, nous avons choisi de sélectionner des protéines capables d’inactiver conditionnellement et
in vivo la protéine Fur. Les aptamères peptidiques forment une classe de biomolécules de reconnaissance artificielles capables d’inactiver une protéine cible. Premièrement, nous avons sélectionné,
in vivo, des aptamères capables de conférer un phénotype caractéristique des mutants fur (résistance au Mn2+). Parmi les aptamères sélectionnés, deux se sont révélés intéressants, Mn1 et Mn2. Leur étude a permis de montrer qu’ils étaient impliqués dans le métabolisme du fer mais aussi celui du stress oxydant. Cependant la cible de ces aptamères s’est révélée ne pas être Fur. Deuxièmement, nous avons entrepris une sélection d’aptamères interagissant avec la protéine Fur en utilisant la technologie du double hybride chez la levure. Nous avons isolé 4 aptamères (F1 à F4) qui interagissent et inhibent Fur de manière différente. La caractérisation de ces aptamères nous a permis de suggérer un mode d’action pour chacun d’entre eux ainsi que des informations sur le rôle de Fur.Jury : Président : Pr Hans Geiselmann
Rapporteur : Dr Agnès Labigne
Rapporteur : Dr Marie Andrée Mandrand
Examinateur : Pr Frédéric Barras
Directeur de thèse : Dr Isabelle Michaud-Soret
Co-Directeur de thèse : Dr Pierre Colas
Mots-clés :Fur, aptamère peptidique, fer, stress oxydant, bactérie, double hybride, résistance au manganèse
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