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Peng Tu

Étude des canaux TRPC6 sensibles au diacylglycérol dans les neurones de cortex de souris et de leurs rôles dans le transport de métaux de transition



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Publié le 23 septembre 2009


Thèse soutenue le 23 septembre 2009 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Biologie

Résumé :
Les canaux TRPC6 sont des canaux cationiques non sélectifs activés par le diacylglycérol (DAG). Ils sont présents dans de nombreux tissus et types cellulaires, notamment dans le cortex de souris embryonnaire (à E13). Des expériences d'imagerie calcique réalisées sur des neurones de cortex de souris en culture ont révélé la présence de canaux cationiques activés par le DAG. Ils sont perméables aux ions Ca2+, Na+, Ba2+ et Mn2+. L'entrée de Ca2+via ces canaux est indépendante de la protéine kinase C et elle est bloquée par le SKF-96365 et le Gd3​+. Par ailleurs, l'acide flufénamique augmente l'amplitude des réponses calciques induites par le DAG. Des expériences d'électrophysiologie réalisées avec la technique du patch-clamp en configuration cellule entière ont montré que l'hyperforine, un activateur des canaux TRPC6, donne naissance à un courant cationique non sélectif, confirmant ainsi l'existence de canaux de type TRPC6 dans les neurones corticaux.
Des analyses quantitatives en spectrométrie d'émission atomique à plasma couplé inductif, en spectrométrie d'absorption atomique et en fluorescence X avec la nanosonde synchrotron (µ-SXRF) révèlent que la surexpression de TRPC6 dans les cellules HEK-293 s'accompagne d'une augmentation du contenu intracellulaire en zinc, en soufre et en manganèse. Les résultats obtenus avec des sondes fluorescentes sensibles au zinc et au fer indiquent que les canaux TRPC6 peuvent transporter ces cations. Par ailleurs, les expériences en µ-SXRF montrent que l'activation des canaux TRPC6 en présence de fer induit une accumulation de ce métal dans les cellules HEK et les neurones.
Au cours de notre étude, nous avons également mis en évidence l'action de deux agents (l'acide flufénamique et l'hyperforine), couramment utilisés pour modifier l'activité des canaux TRPC6, sur la physiologie mitochondriale et l'homéostasie des métaux. En effet, l'acide flufénamique et l'hyperforine non seulement modifient le fonctionnement des canaux TRPC6 mais ils exercent aussi une action de type découplante sur les mitochondries, provoquant une libération de Ca2+ et de Zn2+ à partir de ces organelles.

Jury :
Président : Dr Claude Feuerstein
 Rapporteur : Dr Thierry Capiod
Rapporteur : Dr Jean-Yves Chatton
Examinateur : Dr Janique Guiramand
Examinateur : Dr Isabelle Marty
Directeur de thèse : Dr Alexandre Bouron

Mots-clés :
Neurones de cortex, cellules HEK-293, TRPC6, diacylglycérol, acide flufénamique, hyperforine, rayonnement synchrotron, fluorescence X, fer, zinc, cuivre, manganèse

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