Fabien Pierrel
Modification des ARNt par une protéine «Radical-SAM». Étude de la protéine MiaB
Publié le 20 septembre 2004
Corps de texte 1
Thèse soutenue le 20 septembre 2004 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Biologie structurale et nanobiologie
Résumé
Les ARNt sont des molécules clés de la machinerie traductionnelle puisqu’ils assurent le décodage exact des codons successifs de l’ARN messager (ARNm) au sein du ribosome, permettant ainsi la synthèse de la protéine correspondant à l’ARNm. Les ARNt matures ont une taille comprise entre 73 et 95 nucléotides dont beaucoup sont constitués de nucléosides modifiés (86 différents ont été identifiés). Nous nous sommes intéressés à l’un de ces nucléosides modifiés, la 2-méthylthio-N6-isopentenyladénosine (ms2i6A) présente en position 37 de certains ARNt. La biosynthèse de ms2i6A peut être divisée en 2 étapes : d’une part une réaction bien caractérisée qui correspond à l’ajout d’un groupement isopentenyle en position N6 de l’adénosine 37 par la protéine MiaA et d’autre part une étape de thiométhylation de la position 2 de l’isopentenyladénosine 37 (i6A-37). Avant ce travail, les seules choses connues sur cette seconde étape étaient qu’elle nécessite la présence de S-Adénosylméthionine (SAM), de fer, de L-cystéine et qu’elle implique au moins la protéine MiaB. Au cours d’études
in vivo et
in vitro, nous avons pu montrer que la protéine MiaB est une protéine à centre Fe-S appartenant à la famille récemment identifiée des protéines « Radical SAM » qui utilisent un mécanisme d’activation radicalaire particulier. Nous avons également mis en évidence que MiaB catalyse à la fois les réactions de thiolation et de méthylation de la position 2 de i6A-37. La réaction complexe de formation de la liaison C-S sur le carbone aromatique non activé de i6A-37 reste incomprise mais quelques éléments de réponse sont apportés aux nombreuses questions posées.
Jury :
Président : Dr Jacques Meyer
Rapporteur : Pr Andrée Marquet
Rapporteur : Pr Christiane Branlant
Examinateur : Dr Joël Caillet
Directeur de thèse : Pr Marc Fontecave
Codirecteur de thèse : Dr Mohamed Atta
Mots-clés :
ARNt, nucléoside modifié, ms2i6A, MiaB, Radical SAM, liaison C-S
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