Florence Luttringer
La ribonucléotide réductase anaérobie d'Escherichia coli, une protéine à zinc. Importance du site métallique pour la structure et l'activation de l'enzyme
Publié le 10 novembre 2006
Corps de texte 1
Thèse soutenue le 10 novembre 2006 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Biologie structurale
Résumé
Les ribonucléotides réductases (RNR) sont des enzymes ubiquitaires essentielles pour la synthèse d’ADN. La croissance en anaérobiose d’Escherichia coli dépend d’une RNR de classe III. L’enzyme activée contient un radical sensible à l’oxygène situé sur le résidu G681 dont la formation implique l’intervention concertée d’une protéine activatrice fer-soufre, de S-adénosylméthionine, de dithiothréitol (DTT), et d’un système réducteur. La structure cristallographique de la RNR du bactériophage T4 a révélé la présence d’un site métallique Zn(Cys)4 dans la partie C-terminale de la réductase. Dans ce travail nous avons défini de nouvelles conditions de purification conduisant à des enzymes très actives, montré que le zinc contrôle la structuration de la boucle Cter contenant le site radicalaire et que, contrairement à ce qui était admis depuis plus de 15 ans, le DTT n’intervient pas dans la formation du radical Gly• mais plutôt dans les transferts radicalaires entre Gly• et le substrat.
Jury :
Président : Dr Florent Guillain
Rapporteur : Dr Catherine Berthomieu
Rapporteur : Dr Jean-Luc Boucher
Directeur de thèse : Dr Étienne Mulliez
Codirecteur : Pr Marc Fontecave
Mots-clés :
Catalyse enzymatique, radical, zinc, protéolyse
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